Экспресс диагностика особо опасных инфекций

лекарственных веществ, а также методы температурной и кислотной агрегации,

коагуляции микробных суспензий и их токсинов.

13. Рецепторное и генетическое направления быстрой индикации патогенных

и санитарно-показательных микроорганизмов. Методы, основанные на этих

принципах, только начинают развиваться. Так, с помощью целлюлозно-

глобулинового или эритроцитарно-глобулинового диагностикумов быстро

обнаруживают патогенный стафилококк, содержащий белок А, а путем гомологии

неизвестных нуклеиновых кислот с известными нуклеиновыми кислотами

устанавливают вид патогена.

14. Комплексное направление ускоренной идентификации патогенных и

санитарно-показательных микроорганизмов, использующее методы экспресс-

индикации, основанные на интеграции различных принципов, связано с

разработкой и созданием индикаторных тест-систем, позволяющих в течение

короткого срока и с минимальными затратами на анализ определить комплекс

основных признаков патогена или санитарно-показательного представителя,

достаточных для его идентификации до рода, вида и даже типа.

15. Направления, связанные с разработкой новых принципов

микробиологического анализа. Вполне вероятно, и мы вправе ожидать в

ближайшие 5—10 лет появления новых идей, подходов и принципов в

микробиологической науке и смежных с ней областях. Открытие новых видов

рецепторной, иммунологической и генетической специфичности у микробов

позволит создать новые и возможно более совершенные методы быстрой

идентификации микроорганизмов.

Основные пути развития экспресс-индикации микроорганизмов на ближайшие

годы:

1) создание и конструирование новых препаратов, способствующих

ускорению и удешевлению исследований, повышению эффективности лабораторной

диагностики инфекций и индикации патогенных и других микроорганизмов. На

этом пути предстоит сделать очень многое, поскольку общепринятые

диагностические препараты в значительной степени исчерпали свои

потенциальные возможности;

2) разработка новых более чувствительных, простых методов лабораторного

анализа.

3) разработка комплексных методов и видов исследований. Будет

продолжаться дальнейшая интеграция методов и видов исследований, имеющих

разные принципы действия, лежащие в их основе;

4) создание новых схем исследований. Поскольку лабораторная диагностика

инфекционных болезней, а также экспресс-индикация, хотя и в меньшей

степени, связаны с изучением комплекса различных свойств и особенностей

микроорганизмов с использованием обычно разнообразных методов и приемов,

основанных на различных принципах, то создание новых схем исследований с

применением новых методов является объективной реальностью и важной

задачей, вытекающей из существа самого процесса развития

микробиологического анализа;

5) разработка и создание новых методов регистрации и учета результатов

экспресс-индикационных и лабораторных исследований.

6) разработка новой микроминиатюрной лабораторной посуды, аппаратуры и

приборов для исследований;

7) автоматизация и компьютеризация исследований.

В современных условиях эти вопросы должны решаться комплексно.

Таким образом, рассмотренные основные направления и пути развития

экспресс-индикации микроорганизмов в период современного научно-

технического прогресса естественных наук безусловно получат дальнейшее

ускоренное развитие, а микробиологическая лабораторная практика обогатится

новыми быстрыми методами индикации микробов.

Экспресс-диагностика холеры

Холеру вызывают два биовара Vibrio cholerae. Один из них, выделенный

Кохом в Египте в 1883 году, назвали классическим, другой, полученный

Ф.Готшлихом на карантинной станции Эль-Тор в Северной Африке в 1906 году –

V.eltor. оба биовара неагглютинирующиеся вибрионы (НАГи), галофильные

парагемолитические вибрионы, продуцирующие гемолизин, и нехолерные вибрионы-

кислотообразователи включены в род Vibrio семейства Vibrionaceae.

Это острая кишечная инфекция, сопровождающаяся резким обезвоживанием и

обессоливанием организма. Источником инфекции является человек – больной

или носитель. Механизм передачи фекально-оральный.

Возбудители имеют соматический О- и жгутиковый Н-антигены. О-антиген

обладает видовой и типовой специфичностью. По строению О-антигена различают

долее 40 сероваров. Развивающийся к холере иммунитет носит гуморальный

характер.

Материал для исследования: испражнения, рвотные массы, трупный

материал.

Метод массового исследования на вибриононосительство. Материал берется

непосредственно из кишечника при помощи стеклянной трубочки диаметром 0,5

см (для детей), 1,5 см (для взрослых) и длиной 15 см с оплавленными концами

(при отсутствии трубочек используют ватные тампоны на деревянных палочках).

Трубочку немедленно погружают во флакон, содержащий 100 – 200 мл 1%

пептонной воды и агглютинирующую холерную О-сыворотку в разведении до

половины ее титра. В один и тот же флакон берут материал от 10 лиц. Флаконы

помещают в термостат при 370С. Через 3 – 4 часа холерные вибрионы начинают

агглютинироваться и постепенно (в течение ближайших 2 часов) падают в виде

хлопьев на дно флакона. Исследуя под микроскопом окрашенные мазки и

«висячую каплю», обнаруживают склеившихся и частично свободных вибрионов.

Через 6 часов дается ответ и в случае обнаружения холерных вибрионов

немедленно производится посев индивидуально от каждого из 10 лиц. Такой

метод дает возможность исследовать до 16 000 человек за 3 – 4 дня.

Метод иммунодиагностической микропленки. Изучение антигенных свойств

холерных вибрионов проводят путем постановки пробирочной или пластинчатой

реакции агглютинации с использованием сухих лиофилизированных

диагностических агглютинирующих холерных 0-сывороток и сывороток Огава и

Инаба. Сыворотку разводят в физиологическом растворе или дистиллированной

воде и смешивают при постановке агглютинации на стекле с исследуемой

культурой вибрионов. При подготовке сыворотки используется дополнительная

посуда, что усложняет работу бактериолога, а в оставшейся разведенной

сыворотке быстро прорастает бактериальная микрофлора и инактивирует ее.

Для изучения антигенной структуры холерных вибрионов были разработан

иммунодиагностический препарат в виде микропленок разового применения,

который обладал достаточной специфичностью, демонстративностью и

экономичностью. Иммунодиагностические холерные микропленки (ИХМП) в виде

полимерной пленки с нанесенными высушенными каплями, фиксированными на

бумаге, содержат минимальное количество сыворотки, пленкообразующий

компонент и консервант. Пленкообразующий компонент связывает, склеивает и

фиксирует микроколичества ингредиентов к поверхности носителя, исключает

крошение микропленок; консервант предохраняет препарат от разрушения при

длительном хранении.

Концентрация диагностической сыворотки в ИХМП является достаточной,

поскольку после эмульгирования в капле физраствора, антитела содержатся в

титре 1:100, что полностью обеспечивает ход реакции. Тем самым

обеспечивается достаточная концентрация антител, снижается, расход

диагностической сыворотки и исключается возможность ее неиспользования. При

этом создаются условия для быстрого растворения ИХМП, контакта ее с

холерными вибрионами и проведения реакции непосредственно на полимерной

пленке.

Готовые ИХМП хранят в темном сухом месте при 4— 7°С в картонных

коробках (срок годности 3 года — срок наблюдения) и по мере надобности ИХМП

используют для определения холерных вибрионов. Для исключения случайного

заражения окружающих предметов ИХМП помещают в чистую чашку Петри. На

поверхность ИХМП наносят каплю физиологического раствора, в которой

растворяют ее. Разведенную сыворотку смешивают с изучаемой культурой

вибрионов, снятой бактериологической петлей с питательной среды. При другом

варианте постановки реакции ИХМП снимают скальпелем с бумажной подложки и

переносят на предметное стекло, растворяют в капле физиологического

раствора и смешивают с изучаемой культурой вибрионов.

При положительной реакции через 1—3 мин появляются зерна агглютината,

окрашенные в зеленый цвет, а капля просветляется. При отрицательной реакции

капля остается гомогенно-мутной.

Использованную часть полимерной пленки отрезают, а оставшуюся часть

пленки с ИХМП сохраняют в той же чашке Петри для дальнейших исследований.

Использование ИХМП в исследованиях вибрионов и других микроорганизмов

позволяет получить статистически достоверные результаты, сэкономить

дорогостоящие диагностические сыворотки, повысить качество и эффективность

исследований.

Реакция агглютинации микрометодом. В последнее время в

бактериологической практике нашел довольно широкое применение микрообъемный

метод постановки серологических реакций с использованием специальных

планшеток и микротитровальных игл .

Реакции агглютинации микрометодом ставят с холерными агглютинирующими

референс-сыворотками в полистроловых микротитровальных планшетках с плоским

или V-образ-ным дном, предназначенных для иммунологических реакций,

используются мпкротитровальные планшетки с объемом лунок 0,4 мл и в

пробирках параллельно. Предварительно планшетки тщательно промывfют

проточной водой, каждую лунку прополаскивали дистиллированной водой и

хорошо просушивали, затем делали надписи простым карандашом.

Во все лунки четырех рядов пипеткой-капельницей из микротитратора

Такачи вносят 0,85% раствор хлористого натрия (рН 7,2) в объеме 0,05 мл,

затем в первую лунку каждого ряда — того же объема соответствующей

сыворотки в разведении 1:25 и проводят ее титрацию микротитроваль-ной иглой

с головкой (объем 0,05 мл), удаляя из последней лунки по 0,05 мл.

После титрации сывороток во все лунки, кроме их контролей, вносят 0,05

мл взвеси исследуемой агаровой культуры. Эту манипуляцию проводят на

подносе.

По окончании титрации планшет накрывают крышкой и ставят на подносе в

термостат при 37° С. После 2-часовой экспозиции проводят окончательный учет

реакции под стереомикроскопом (МБС-1, МБС-2) в косопроходящем свете. При

учете реакции крышку с планшетки не снимают, в случае ее запотевания

заменяют другой.

После учета реакции планшетку и крышку складывают в кювет и заливают

5'% хлорамином так, чтобы все лунки планшетки были заполнены дезраствором.

Исследования показали, что все холерные вибрионы классического и эльтор

биоваров агглютинируются холерной видовой 0-сывороткой в микрообъемах.

Что касается агглютинабельности типоспецифическими сыворотками, то

прослеживается следующая закономерность:

при постановке с сывороткой Инаба в микрометоде агглютинировались 100,

а в пробирках—90% штаммов классического холерного вибриона серовара Инаба.

Холерные вибрионы биовара эльтор серовара Инаба агглютинировались в

планшетках и пробирках соответственно в 95 и 96% случаев. У холерных

вибрионов классического и эльтор биоваров серовара Огава соотношения в

обеих методиках были практически те же.

Интересен факт, что при постановке реакции агглютинации с RO-сывороткой

наибольшее число штаммов, агглютинирующихся RO-сывороткой до титра, было

выявлено в микрометоде; в пробирках агглютинация установлена у одного

штамма.

Все штаммы вибрионов 040—056 сероваров в микрометоде не

агглютинировались холерными агглютинирующими сыворотками, а в пробирках

штамм II 258-1099 (040 серовара) агглютинировался всеми холерными

сыворотками.

Большинство изученных штаммов представителей семейства

Enterobacteraceae также не агглютинировалось холерными агглютинирующими

сыворотками, за исключением Sh. flexneri 2503, у которого в пробирках была

выявлена агглютинация со всеми сыворотками, и штамма S. typhimurium 21, у

которого отмечена неспецифическая реакция агглютинации со всеми сыворотками

как в пробирках, так и в планшетках.

При пользовании этим методом расход агглютинирующих сывороток

уменьшается в 10 раз, значительно сокращается время, необходимое для

постановки реакции, и ускоряется срок выдачи ответа. Кроме того, описанный

метод менее трудоемок. Таким образом, стандартность, достоверность

полученных результатов, высокая экономичность метода позволяют

рекомендовать его при идентификации холерных вибрионов, изучении штаммов и

популяции штаммов холерных вибрионов по признаку агглютинабельности.

А также:

Иммобилизация вибрионов холерными сыворотками и типовыми холерными

фагами. Капли испражнений или материала с поверхности пептонной воды

обрабатывают холерной О-сывороткой, типовыми сыворотками Огава и Инаба или

типовыми холерными фагами. Готовят из них препараты «раздавленная капля»,

которые исследуют с помощью темнопольной и фазовоконтрастной микроскопии. В

положительном случае через 3-5 минут движение вибрионов прекращается.

РИФ. Препараты из исследуемого материала обрабатывают флюоресцирующей

противохолерной сывороткой и исследуют в люминесцентном микроскопе.

Положительным результатом считается обнаружение в препарате даже единичных

вибрионов с ярким желто-зеленым свечением в виде блестящего ободка по

периферии клетки. Положительный результат можно получить через 1-2 часа

после начала исследования при концентрации вибрионов не менее 106 клеток в

1 мл., поэтому рекомендуется предварительно подращивание материала на

питательных средах.

Экспресс-диагностика туляремии

Возбудитель туляремии (Туляре – район Калифорнии) – Franciella

tularensis относится к роду с невыясненным положением в систематике

микробов. Этиологическая природа туляремии была установлена в 1912 году

Г.Мак-коем и Ш.Чепиным, а далее подробно изучена Э.Франсисом.

Туляремия – тяжелая кровяная зоонозная инфекция с природной

очаговостью. Основные источники инфекции – водяные крысы, ондатры, зайцы,

крысы, мыши. Больной человек неконтагиозен и для возбудителя является

биологическим тупиком. Передается трансмиссивным путем через клещей, а

нередко и контактным, алиментарным или аспирационным путем.

Возбудитель содержит нуклеопротеидный О- и оболочечный белково-липидный

Vi-антиген. У перенесших болезнь вырабатывается очень напряженный и

длительный иммунитет.

Материал для исследования: кровь, гной, пунктат бубона, слизь из зева.

Реакция агглютинации-рассеивания. Предложена простая, быстрая,

высокочувствительная и специфичная реакция агглютинации-рассеивания, для

постановки которой используется антительный диагностикум. Это суспензия

темно-коричневого цвета, представляющая собой комплексное соединение

шаровидных крупнодисперсных НК-частиц (Никитин и Котич) и

противотуляремийных иммуноглобулинов. Препарат хранят в холодильнике при

+4°С в течение 2—3 лет. По истечении 3 лет препарат можно

ресенсибилизировать, так как НК-частицы высокостабильны.

Для постановки реакции агглютинации-рассеивания на тщательно

обезжиренное предметное стекло наносят слева каплю исследуемого материала

(опыт), справа — каплю физиологического раствора или гетерологичного

микроба (контроль). Затем к каплям добавляют по одной капле НК-антительного

туляремийного диагностикума. Перемешивание капель производят путем

вращательного движения предметного стекла по часовой стрелке и через 1— 5

мин оценивают результаты реакции.

Учет и оценка результатов производятся невооруженным глазом, а также с

помощью лупы и микроскопа в течение 1—5 мин. При положительной реакции в

случае наличия туляремийного микроба или его антигена в исследуемом

материале в небольших количествах (до 1—3 млн по стандарту ГКИ) отмечается

феномен рассеивания шаровидных НК-частиц по всей площади капли, что

регистрируется под малым увеличением микроскопа, а при концентрации 3—5 млн

и более — феномен образования темно-коричневых зерен агглютината, видимых

невооруженным глазом. При отрицательной реакции формируется четко

очерченное, темно-коричневое пятно или точка в центре капли.

Предлагаемая реакция с использованием туляремийного НК-диагностикума

предназначена для быстрого выявления специфического антигена при

исследовании объектов внешней среды, пищевых продуктов, трупов павших

грызунов, а также в тех случаях, когда из-за массивного пророста

посторонней микрофлоры или гибели микроба выделение его посевом или через

биологическую пробу не удается. Реакция строго специфична и позволяет

обнаруживать туляремийный микроб в небольших количествах (300 тыс. — 1 млн.

м.к./мл) или его антиген.

А также ТИФМ и др.

Экспресс-диагностика чумы

Возбудитель чумы был открыт в 1894 году в Гонконге А.Иерсеном и в его

честь был назван Yersinia pestis. К роду иерсиний относятся также Y.

pseudotuberculosis и Y. enterocolitica, вызывающие септические

гастроэнтероколиты или иерсиниозы.

Чума – особо опасная, очень тяжелая кровяная инфекция, склонная к

широкому распространению и дающая высокий процент смертности (от 20 до

100%). Это зоонозная трансмиссивная природно-очаговая инфекция. Источники -

крысы, суслики, песчанки, полевки, сурки, мышевидные грызуны.

Переносчики - кровососущие насекомые.

В составе бактерий чумы содержится более полутора десятков

специфических и групповых антигенов. Переболевшие приобретают пожизненный,

устойчивый иммунитет фагоцитарного характера.

Материал для исследования: содержимое бубонов, отделяемое язв, мокрота,

кровь, испражнения.

Метод бумажных индикаторных систем. Классические методы (посев на среды

Гисса) громоздки, требуют много времени и большого количества питательных

сред, имеющих ограниченный срок годности. В настоящее время эти методы не

удовлетворяют запросам противочумной системы. В настоящее время наиболее

перспективным методом определения ферментативной активности штаммов

возбудителя чумы с целью идентификации выделяемых культур и изучения их

свойств можно считать метод углеводно-бумажных дисков, предложенный

В.М.Никитиным и С.В.Плугару. В качестве среды лучше использовать бульон

Хоттингера, т.к. он дает наиболее быструю ферментацию – 3 часа.

Целесообразно применять БИС в полевых условиях, так как наборы компактны и

могут длительное время храниться при комнатной температуре.

Фаготипирование. 1. Внесение бактериофага в исследуемый материал в

момент его посева на агар с генцианвиолетом позволяет обнаружить под

микроскопом негативные колонии фага или «дорожку» в первые часы, когда рост

бактерий еще почти не заметен (через 2,5 – 3 часа). Метод прост, доступен и

дает хорошие результаты при высокой концентрации чумного микроба и при

относительно большом содержании посторонних микроорганизмов.

2. Определение нарастания титра чумного фага, вносимого в исследуемый

материал, где в случае наличия возбудителя фаг начинает размножаться уже

через 30-40 минут. В жидкий исследуемый материал (25-50-100 мл) и в

контрольную жидкость добавляют столько фага, чтобы получить его разведение

1:50 – 1:100; ставят пробы в термостатах при 370C на 45-60 минут. После

инкубации берут 0,5 мл жидкости из каждой пробы и разводят бульоном в 10

раз; из этого первого разведения фага готовят серию последовательных 10-

кратных разведений (до 10-10 – 10-11). По 0,5 мл жидкости из каждого

разведения исследуемого и контрольного рядов добавляют к 2,5 мл полужидкого

агара (0,1%), предварительно расплавленного и затем охлажденного до 48-

500С. Тут же к агару добавляют 0,1 – 0,2 мл взвеси 1 – 2 суточной

индикаторной культуры (вакцинный штамм чумного микроба), содержащий 15-20

млрд микробов в 1 мл. Содержимое пробирок тщательно перемешивают и выливают

на чашки Петри с 2% агаром Хоттингера. После того, как полужидкий агар

застынет, чашки перевертывают дном кверху и ставят в термостат при 370С.

Учет результатов производят через 3-4 часа. На фоне сплошного роста

индикаторной культуры видны стерильные пятна (негативные колонии фага),

количество которых на чашках с исследуемым материалом может превосходить в

100-1000 и более раз число негативных колоний на контрольных чашках.

Благодаря хорошей диффузии фаговых частиц и бактериальных клеток через

полужидкий агар двухслойный метод дает стерильные пятна большего размера,

чем при размазывании исследуемой массы шпателем по поверхности агара.

Подсчет колоний ведут в счетной камере.

А также: РИФ, РПГА и др.

Некоторые другие методы

Хемилюминесцентный иммуноанализ. Новым этапом на пути развития

иммунологических методов диагностики ООИ является хемилюминесцентный

иммуноанализ — ХЛИА. Преимущество этого метода определяется его высокой

чувствительностью, относительной простотой и производительностью,

возможностью полной автоматизации

В открытой литературе имеются отдельные сообщения, посвященные

применению ХЛИА в медицинской микробиологии, как для обнаружения

бактериальных антигенов, так и для поиска специфических антител

Цель нашей работы заключалась в отработке оптимальных условий

постановки ХЛИА для ускоренной диагностики ООИ, сравнительной оценке этого

теста с общепринятыми реакциями — МФА, РПГА и ТИФА.

Объектами исследования служили взвеси возбудителей чумы, сапа,

мелиоидоза, бруцеллеза и сибирской язвы, обеззараженные 0,5% формалином,

всего 100 штаммов.

Специфичность препаратов и метода контролировали на 42 штаммах

близкородственных и гетерологичных микроорганизмов.

В качестве диагностических препаратов для обнаружения возбудителей

чумы, сапа, мелиоидоза, бруцеллеза и сибирской язвы в ТИФА и ХЛИА

использовали специфические иммуно-пероксидазные конъюгаты к соответствующим

возбудителям ООИ, полученные методом перйодатного окисления на основе

иммуноглобулинов из кроличьих иммунных сывороток и пероксидазы, рабочее

разведение которых составляли соответственно 1:200—1:300 и

1:1000—1:1500.Подготовку и постановку ТИФА и ХЛИА осуществляли общепринятым

способом В качестве субстратов использовали: для ТИФА — о-фенилендиамин,

для ХЛИА — смесь люминола с перекисью водорода и р-йодфенола. Постановку

МФА и РПГА проводили по общеизвестной методике.

Результаты ТИФА и РПГА учитывали визуально, МФА — при помощи

люминесцентного микроскопа, ХЛИА — на люминометре.

Чувствительность ХЛИА на 1—2 порядка выше, чем ТИФА и на 2—4 порядка

превышает чувствительность общепринятых тестов — МФА и РПГА. При этом метод

достаточно специфичен.

Хемилюминесцентный анализ при использовании автоматических приборов

постановки и учета результатов отличается экономичностью и высокой

разрешающей способностью, заслуживает внедрение в практику медицинских и

ветеринарных лабораторий.

Специфичность ХЛИА зависит от качества использованных иммуноглобулинов.

На 42 близкородственных и гетероло-гичных штаммах положительные реакции

получены с Y. pseu-doTuberculosis 816111(37°) с чумными общими ИПК и В.

sereus 1 и 3 с сибиреязвенными ИПК в концентрациях 1 -106 м. т./мл.

ХЛИА следует рекомендовать для лабораторной диагностики ООИ особенно в

тех случаях, когда в исследуемом материале предполагается незначительное

содержание возбудителя.

Иммуноблотинг. Иммуноблоттинг — разновидность гетерогенного иммунного

анализа. Сущность его заключается в переносе молекул исследуемого вещества

с одного твердого носителя, используемого для фракционирования

биополимеров, на другой, где с помощью иммунохимической реакции происходит

их специфическое выявление.

В зависимости от исследуемого вещества различают ДНК,— РНК и белок —

блоттинг.

При постановке иммуноблоттинга соблюдается следующая методическая

последовательность: электрофоретическое разделение анализируемого

материала на индивидуальные белки или полипептиды в геле; получение реплики

путем блоттинга белков или полипептидов с геля на твердофазный матрикс;

блокирование фона, отмывка от компонентов, используемых при блокировании

фона; инкубирование со специфической тест-сывороткой; отмывка от избытка

сыворотки; инкубирование с Jg к антителам специфической тест-сыворотки,

конъюгированными с меткой; отмывка от избытка меченого иммунореагента;

выявление тестируемых антигенов авторадиографически или ферментативно по

реакции с соответствующим субстратом.

Иммунохимическое выявление антигенов можно проводить с помощью антител,

конъюгированных с меткой. В качестве метки в последнее время широко

применяют либо радиоактивные изотопы, либо ферменты (пероксидазу, щелочную

фосфатазу, лактамазу и др.).

Время блоттинга путем диффузии составляет 36—48 ч. Но наиболее быстрый

и эффективный способ переноса белков с гелей — электроблот, время которого,

в основном, составляет 1—3 ч (2), для некоторых высокомолекулярных белков—

более 12 ч.

Конкретный выбор сорбентов для различных модификаций блотов

(нитроцеллюлоза либо бумага, обработанная соответствующим образом), выбор

условий блокирования и иммуно-химического выявления антигенов полностью

зависит от антигена, его количества, метода иммуноанализа и целей

исследования.

Метод ИБ по целому ряду обстоятельств получил наибольшее

распространение как метод, пригодный для использования в качестве теста

подтверждения.

Безусловное достоинство метода — возможность тестирования антител к

слабо или вовсе нерастворимым антигенам и исключение стадии введения

радиоактивной метки в антигены.

О чувствительности в случае ИБ судят по предельному количеству

нанесенного на гель антигена, которое при фракционировании белков удается

выявить иммунохимически после переноса с геля на твердую фазу

(нитроцеллюлозу). Общая чувствительность анализа зависит от целого ряда

причин: условий фракционирования и иммобилизации антигена на твердом

носителе, уровня фона, специфичности и аффинности антител. Важное значение

имеет вид используемой метки и способ ее выявления.

Таким образом, метод иммуноблотинга позволяет идентифицировать зоны

антигена на твердой фазе, не связывая весь белок с антителами специфической

сыворотки. Иммуноблотинг и его модификации в основном используются для

типирования бактериальных и вирусных антигенов и антител, особенно в случае

недостаточной разрешающей способности обычных систем, а также при анализе

иммуноглобулинов, нуклеиновых кислот или как тест подтверждения в сочетании

с другими методами.

Обнаружение возбудителей, антигенов и антител при помощи суспензионных

препаратов. Принцип: фиксированные на частицах компоненты вступают в

реакцию антиген-антитело, которая сопровождается образованием крупных,

видимых невооруженным глазом агломератов. В суспензионных препаратах для

обнаружения и количественного определения антигенов и антител используется

свойство многих неорганических и органических веществ, таких как

активированный уголь, дерматол, бентонит, каолин, гидроокись алюминия,

силикаты, сульфат бария, полистирол и т. д. физически сорбировать

биополимеры на своей поверхности.

В. Никитина применила цветные целлюлозные антигены для ускоренной

диагностики чумы и туляремии, которые за 5—10 минут дают возможность в

реакции непрямой агглютинации обнаружить иммунные антитела. Eisler показал,

что животный уголь адсорбирует антитела против холерного гемолизина.

Величина адсорбции антигемолизинов зависит от титра антигемолитической

сыворотки. Животный уголь интенсивно адсорбирует антигемолизины из

сывороток с невысоким титром антител. С возрастанием титра

антигемолитических сывороток интенсивность адсорбции антигемолизинов углем

уменьшается. Древесный уголь или частички химически чистого угля могут быть

использованы как носители антител аналогично латексу и бентониту. Препараты

типа угольных сывороток обладают двумя ценными свойствами: они сохраняются

длительное время в сухом виде и не нуждаются в добавлении консервантов. Как

показали исследования Р. X. Яфаева, антитела могут быть фиксированы на

поверхности частиц активированного угля адгезионным методом — путем

прикрепления антител к частицам пленкой денатурированного белка. Суспензия

частиц угля, содержащая адсорбированные антитела специфически агломерирует

при добавлении к ней гомологичного антигена.

Использование анионообменной смолы в качестве носителя антител нашло

применение при обнаружении возбудителей холеры и везикулярного стоматита.

Частицы смолы, соединенные с антителами, агглютинируют при добавлении

материала, содержащего специфический антиген.

Заключение

Существует большое разнообразие методов экспресс-диагностики особо опасных

инфекций, основанных на различных принципах. Выбор того или иного должен

производится в соответствии с техническими возможностями лаборатории,

контингентом зараженных людей, характером и масштабом распространения

предполагаемой инфекции. Диагностику необходимо провести в наиболее

короткие сроки, так как от этого зависит эффективность изоляции и лечения

больных. При работе с патологическим материалом важно учитывать и

предупреждать возможность заражения медицинского персонала, поэтому надо

строго соблюдать инструкции по сбору материала от больных.

Классические методы экспресс-диагностики в большинстве своем исчерпали

себя, в связи с этим необходимо разрабатывать принципиально новые, такие

как ПЦР и др. и автоматизировать существующие.

Таким образом, экспресс-диагностика ООИ и по сей день остается актуальной

и одной из важнейших задач микробиологии и эпидемиологии.

Список использованной литературы

1. Ускоренные методы диагностики инфекционных болезней (сб. тр.)

–Кишинев, «ШТИИНЦА», 1987.

2. Препараты для экспресс-диагностики (сб. тр.) – Ленинград, 1981.

3. Иммунохимия и лабораторная диагностика особо опасных инфекций (сб.

тр.) – Саратов, 1985.

4. Щербак Ю.Ф. Особо опасные инфекции – М., «Медицина», 1975.

5. Ранняя и дифференциальная диагностика основных инфекционных

заболеваний (уч.-мет. пособие) – Ленинград,1988.

6. Медицина катастроф (уч. пособие) – М., «ИНИ Лтд», 1996.

7. Лебедева М.Н. Руководство к практическим занятиям по медицинской

микробиологии – М., «Медицина», 1973.

8. Борисов Л.Б., Козьмин-Соколов Б.Н., Фрейдлин И.С. Руководство к

лабораторным занятиям по медицинской микробиологии, вирусологии и

иммунологии – М., «Медицина», 1993.

9. Повлович С.А. Медицинская микробиология в графах – Минск, «Вышэйшая

школа», 1986.

Страницы: 1, 2