Структура грамицидинового канала, его фундаментальное и практическое значение

p> А Б

В

Рисунок 5 Положение боковых радикалов остатков триптофана в различных конформерах грамицидина. Вид сбоку.

Боковые радикалы триптофанов выделенны синим цветом. А – ?6,3- спиральный димер (Структура Урри-Арсеньева, наблюдаемая в мембранах); Б

– ??5,6-двухспиральный димер (Структура Витча, наблюдаемая в органических растворителях); С – ?7,2-двухспиральный димер (структура комплекса грамицидина с ионом цезия в органических растворителях и кристаллах)

Спектроскопические исследования грамицидина в различных мембранах показали, что соотношение спиральных и двухспиральных димеров является функцией степени ненасыщенности липидов, образующих мембрану. При увеличении доли ненасыщенных липидов увеличивается доля двухспиральной конформации. Эти результаты говорят о том, что боковые цепи триптофанов могут взаимодействовать с С=С связями [42]. Модельные исследования в кобинации с экспериметами по изучению липид – пептидных взаимодействий так же подтверждают важность этих аминокислот для стабилизации канальной структуры и оказывают влияние на организацию окружающих грамицидин липидов
[ 17]
В результате (в 90% случаев) грамицидин образуе активный трансмембранный канал одной единственной структуры, являющейся (6,3-спиральным димером. Эта структура аналогична модели предложенной ранее Урри [12].

2.5.Влияние связывания ионов на конформацию грамицидина

Грамицидин способен транспортировать одновалентные катионы через фосфолипидные мембраны [43].Его разная селективность по отношению к различным представителям группы щелочных металов определяется как размером конкретного иона, так и значением его энергии гидратации. Относительные константы афинности с натрием, калием, рубидием, цезием и талием были исследованны с помощью метода регистрации одиночных каналов [44], изучения аналогов грамицидина [45],равновесного диализа [46], ЯМР [47], проводимости воды [48] и показали, что константа связывания талия на порядок меньше чем цезия и на два порядка меньше чем натрия. Дальнейшие исследования показали, что с каналом одновременно могут связываться два иона, причем константа связывания первого катиона больше чем второго [49], что видимо, связано с электростатическим отталкиванием.
Двухвалентные катионы блокируют проведение одновалентных [39] и нетранспортируются грамицидиновым каналом. Последние исследования [49] показали, что частично дегидратированный двухвалентный катион связыватся с грамицидином с большей энтальпией чем одновалентный. Таоке сильное взаимодействие является следствием низкой подвижности двухвалентных катионов в грамицидиновом канале.
Связывание анионов с грамицидиновым каналом не было продемонстрированно, хотя существуют некоторые доказательства их проводимости и влияния на транспорт катионов [44].
Взаимодеиствие грамицидина с одновалентными катионами оказывает слабое влияние (или вовсе не влияет) на форму его спектра КД [50], и, таким образом, на конформацию грамицидина.
Комплексы грамицидина с лизолецитином так же связывают катионы, они были использованны для определения констант связывания [51] и локализации сайтов связывания. В данной системе наблюдается изменение формы спектра КД при связывании катионов (в отличие от комплекса с додецилсульфатом натрия, где такой эффект отсутствует), что свидетельствует об изменении конформации при таком взаимодействии [52].
В органических растворителях наблюдается сильное изменение структуры грамицидина при связывании с катионом , что демонстрируется изменением как формы, так и амплитуды спектра КД.
При исследовании связывания цезия с грамицидином в растворе наблюдается постепенное изменение формы спектра КД, что свидетельствет о плавном переходе из формы свободного грамицидина в ион-связанною. Эти данные были использованны для определения констант связывания цезия, которые составили
К1=170 М-1 – для первого (более крепкого )сайта, и К2=20 М-1 – для второго
(более слабого ) сайта связывания. Константа связывания для лития, определенная тем же методом имеет величину на порядок меньшую, чем таковая для цезия [28]. Константа связывания для натрия была определенны методом
23Na ЯМР [53] и составила 4 М-1. Константы связывания других ионов не были определенны, в связи с их низкой аффинностью, что делает такие изимерения довольно сложными.
В растворе хлороформ-метанол в присутствии тиоцианата цезия грамицидин (по данным двумерной ЯМР-спектроскопии) представляет собой правозакрученную антипараллельную двойную спираль с 7,2 остатка на виток ((7,2-спиральный димер) и сдвигом в 1,5 остатка, что свидетельствует о том, что 1Val не участвует в образовании водородных связей [54] (рис.6). Кристаллические структуры грамицидина дают дополнительную информацию о его трехмерной структуре и, более того, возможность формирования кристаллов в отсутствии и в присутствии ионов позволяют изучить их влияние. Обе ионсвязанная и ионсвободная кристаллические структуры грамицидина являются левозакрученными антипараллельными двойными спиралями и отличаются от форм в растворе значениями углов ( и (, направлением образования водородных связей и регулярностью укладки полипептидного остова. Ионсвободная кристаллическая форма длиннее (31 ?) и уже (внутренняя полость довольно узкая и в некоторых местах не способна связывать ион) чем кристаллическая форма с тиоцианатом цезия (26 ? в длину , 4,9 ? – внутренний диаметр поры, в которой помещается ион цезия) [17].

А

Б

.Рисунок 6.

СРК Изображение правозакрученного антипараллельного двухспирального димера грамицидина с 7,2 остатка на виток (??7,2 -двухспиральный димер)

(PDB Code: 1AV2) в компелексе с цезием. А – вид сверху и ион цезия; Б – вид сбоку. Две молекулы грамицидина в димере показанны разными цветами

(красный и синий).

Конформация полипептидного остова в ион-связанной форме грамицидина более упорядоченна, хотя и имеются некоторые вариации углов ( и ( в районах прилегающих к сайтам связывания катионов, а водородные связи направленны почти параллельно оси спрали [55]. Это говорит о том что данная спираль с большей вероятностью имее 6,4 остатка на виток, чем 7,2 .
Сравнение ион-свободных и ион-связанных форм грамицидина показало, что при связывании происходит переупаковка и адаптация трехмерной структуры под конкретный катион. Такая перестройка возможна при реорганизации водородных связей. Так же наблюдается локальное расширение спирали в местах связывания иона и реориентация карбонильных групп пептидного остова, участвующих в связывании ионов [17].

2.6.Локализация сайтов связывания катионов в различных конформациях грамицидина

Катион связывающие сайты в двухцепочечных структурах могут быть определенны непосредственно из их кристаллических структур в комплексе с хлоридом цезия
[56]. Внутри поры находятся два иона цезия симметрично расположенных на растоянии ~7,2 ? от конца спирали. Сайты связывания сформированны карбонильными группами полипептидного остова, которые, связывая ион ориентируются к оси спирали под углом ~40є. Угловое перераспределение карбонильных групп увеличивает дистанции между группами, образующими водородные связи, и таким образом изменяются значения углов ( и ?.
Карбонильные группы на противоположных сторонах поры, пренадлежащие остаткам 11Trp и 14Leu, являются ближайшими к связанному катиону. В таких кристаллах помимо двух ионов цезия в комплексе с грамицидином так же находятся еще и три иона хлора, два из которых расположенны на противоположных концах спирали, а третий - в её центральной части. Ионы хлора отделены от цезия молекулами растворителя на растояние ~10 ?. Наличие связанных ионов хлора довольно необычно, так как грамицидин не транспортирует анионы, а теоретические расчеты [57] показывают, что энергетический барьер связывания аниона значительно больше чем катиона (что делает вход в канал для аниона менее выгодным). Присутствие аниона внутри поры может быть вызвано высокой концентрацией соли в кристаллах и ионы хлора взаимодействуют с сайтами связывания подобно тому как это делают молекулы растворителя. В кристаллах с тиоцианатом цезия позиция иона цезия отличается от таковой в кристаллах с хлоридом цезия [55]. Исследования показали, что в этих кристаллах сайты связывания находятся ближе к концам спирали.
Наблюдение различных сайтов связывания катионов в кристаллах могут моделировать отдельные стадии транспорта катиона через грамицидиновый канал.
Потенциальные взаимодействия катионов с грамицидиновым каналом были изученны с помощью расчетов теоретических энергий и молекулярно- динамических симуляций [58], и показали важность С-концевой этаноламиновой группы для энергетического профиля канала, а точенее, для локализации энергетического минимума и динамики колебаний карбонильных групп полипептидного остова и трансмембранного транспорта катионов [59].
Замещение С-концевой этаноламиновой группы не влияет на свойства проводимости, она возможно играет роль в стабилизации некоторых конформаций грамицидиновой молекулы. При входе в канал катион постепенно обменивает свою гидратную оболочку на карбонильные группы полипептидного остова грамицидина, этаноламин (а точнее его гидроксильная группа) играет роль своеобразного посредника при таком переходе и забирает часть молекул воды гидратированного иона на себя, облегчая таким образом его вход в канал.
[60].
Энергетические профили спирального и двухспирального димеров отличаются не очень сильно, за исключением величины энергетического барьера при входе в канал, и за счет этого двухспиральные каналы могут иметь меньшую проводимость чем односпиральные [17].

2.7.Взаимоотношения между конформационными состояниями грамицидина и проводящими формами

Грамицидин формирует характерные каналы при исследованиях в черных липидных мембранах. Проводимость одиночных каналов и их время жизни зависит не только от природы липида, формирующего бислой, но и от присутствующих в среде ионов. Проводимость и среднее время жизни грамицидновых каналов находятся в довольно узком диапазоне. В мембранах сформированных из глицерол-моноолеата [43] или из дифитаноилфосфатидилхолина [61] в присутствии 0,1 М NaCl средняя проводимость равна ~5 пикосименс (pS), а время жизни - ~0,5 секунд. При более высоких концентрациях соли проводимость увеличивается, а в более толстых мембранах, полученных при использовании различных растворителей, время жизни канала уменьшается при неизменной проводимости [43]. Симметрия расчитанного энергетического профиля говорит о том, что основная проводящая форма канала представляет собой структуру с центральной симметрией. Соотнося эти данные с остальными результатами можно сказать что основной проводящей структурой является спиральный димер N-конец к N-концу , хотя и нельзя полностью отрицать возможность существования активного канала антипараллельной двухцепочечной спиральной структуры, что было подтвержденно экспериментально [17]. В некоторых экспериментах при различных пропорциях липидов, используемых для формирования бислоя были обнаруженны очень долгоживущие каналы ( время жизни >100 сек.), которые были представленны в соотношении 5-10% по отношению к основной форме. Гибридные аналоги грамицидина, не способные формировать димер N-конец к N-концу, но способные образовывать двойные спирали так же обнаруживали такие же долго живущие каналы [32]. Более того кросс-сшитые аналоги (С-конец к N-концу), так же не способные образовывать димер N-конец к N-концу образовывали долгоживущие каналы в соотношении 80% к основной форме [62].

Помимо основной и долгоживущей форм каналов были обнаруженны еще и “мини” каналы сменьшей средней проводимостью и временем жизни, формирующиеся в различных пропорциях по отношению к основной форме в зависимости от условий образования бислоя [63,64]. Данные каналы предположительно имеют такую же структуру что и основная форма (спиральный димер N-конец к N-концу), но отличаются от нее другой ориентацией карбонильных групп полипептидного остова в сайтах связывания катионов [65].
Изучения синтетических аналогов грамицидина помогают определить молекулярную основу свойств природного грамицидинового канала. Одним из важных наблюдений является корреляция свойств специфической структуры с функцией. Хорошим примером такой корреляции является возможность образования гибридных каналов [66], представляющих собой димеры в которых один мономер представлен каким-либо аналогом, а второй – другим аналогом или же нативным грамицидином.
Одна доминирующая проводящая форма существует в бислоиных мембранах, которая является спиральным димером N-конец к N-концу (голова к голове).
Кроме того существуют другие проводящие формы, найденные в различных пропорциях в зависимости от условий эксперимента. Некоторые из них возможно имеют конформацию двойной спирали.

2.8.Встраивание в мембрану и стабильность

В исследованиях по проводимости грамицидин может быть добавлен к сформированной мембране в качестве концентрированного спиртового раствора.
При встраивании в липосомы грамицидин может быть добавленн таким же образом
( то есть добавление концентрированного спиртового раствора к приготовленным липосомам) [33] или же совместным растворением с липидом перед формированием липосом [26]. Переход грамицидина в активную проводящую форму обычно сопроваждается нагреванием или озвучиванием [67].
Легкость всраивания грамицидина зависит от типа используемого липида и от соотношения липид/грамицидин [23]. В общем липиды с более выской температурой фазового перехода должны нагреваться более сильно для лучшего встраиваия грамицидина. Более того, в образцах, где приходится более 20 молекул липида на молекулу грамицидина нагревания до 30°С достаточно для встраивания грамицидина, а образци имеющие менее 10 молекул липида на молекулу грамицидина необходимо нагревать до 65°С в течение 48 часов для такого же встраивания [17].
Некоторые исследования показывают, что при низких соотношениях грамицидин/липид легкость встраивания зависит от того в каком растворителе до этого находился грамицидин (так называемая история растворения) [68].
Если липид-грамицидиновый комплекс перед образованием липосом был растворен в трифторэтаноле активный канал образуется немедленно вместе с формированием бислоя , если же использовался раствор в смеси хлороформ- метанол, то для встраивания необходимо сильное нагревание. Такая зависимомть исчезает при более высоких соотношениях грамицидин-липид, и не наблюдается никакого эффекта по свойствам проводимости. Это говорит о том, что взаимодействия с липидом играют важную роль в стабилизации активной проводящей структуры а фазовое состояние важно для процесса встраивания .
Также природа комплексов грамициди-липид была изученна с помощью метода ЯМР
[69], которые показали, что при низком соотношении грамицидин – липид липид образует гексагональную фазу, а не бислой. Это так же может быть причиной трудности встраивания грамицидина в данных условиях. С помощью спектров КД был охарактеризован процесс встраивания грамицидина в липид: до начала встраивания в предварительно приготовленные липосомы, грамицидин присутствует в виде двойной спирали в присутствии ионов [67]. При нагревании грамицидин переходит в одиночную спираль и встраивается в бислой. В промежуточные времена этого процесса спектр представляет собой линейную комбинацию спектров этих двух структур. Такие же процессы наблюдаются и в отсутствии иона. Одна из точек зрения на этот процесс заключается в том, что расплетание двойной спирали происходит до тех пор, пока N- конец c другим N-концом и такая структура будет почти эквивалентна спиральному димеру [17]. Такой процесс требует разрыва всех 28 водородных связей и является очень энергоемким, а затем снова их образования. Разница энергий между двух- и односпиральной конформациями не очень велика, так как они имеют почти одинаковое количество водородных связей. В общем, можно сказать, что детали данного процесса до конца не ясны.
Возможно двухспиральная конформация имеет некоторую стабильность в бислое, но когда грамицидин становится ориентирован таким образом, что способен сформировать одиночную спираль, эта конформация становится предпочтительной, и, таким образом можно предположить, что спиральная конформация явлвется результатом специфического взаимодействия и ориентации грамицидина и липида. Теоретические [70] и экспериметальные [71] данные исследований с использованием липидов, в которых кислород карбонильной группы замещен на водород ( имитируя таким образом простую эфирную связь) показали, что одиночная спираль грамицидина дестабилизированна в этих условиях. Таким образом взаимодействия между карбонильными группами липидов и определенными регионами молекулы грамицидина необходимы для формирования канальой структуры (одиночной спирали).

2.9.Инженерия грамицидинового канала

Грамицидин в 90% случаев образует трансмембранный канал одной структуры, такая функциональная и химическая простота делает его уникальной моделью для изучения мембраноактивных пептидов и использования для понимания принципов пространственной организации и функционирования мембранных белков в общем и ионных каналов в частности.
Различные еденичные аминокислотные замены могут быть произведенны в грамиицидине без сильного эффекта на структуру и функцию канала [72], что позволяет проводить эксперименты по выяснению влияния конкретных аминокислотных остатков на свойства грамицидинового канала. Так же можноизучать влияние непротеиногенных (не кодируемых генетически) аминокислот [73].Более того некоторые изменения в первичной последовательности грамицидина дают каналы с качественно новыми функциями или конформациями [41].
Было показанно, что, изменяя первичную последовательность грамицидина, можно сдвигать конформационное равновесие в мембране, получая активные каналы, образованные приемущественно двухспиральными димерами. Так же, модификация первичной последовательности сильно влияет на электрофизиологические характеристики грамицидинового канала и дает возможность варьировать время жизни и проводимость канала[41].
Дальнейшие исследования различных аналогов грамицидина с измененной аминокислотной последовательностью открыли возможность получать потенциалзависимые грамицидиновые каналы. Существет два возможных пути получения каналов с такими свойствами. Первое: образование ассиметричных каналов (гетеродимеров), что влияет на энергетический профиль трансмембранного движения иона, делая его ассимметричным. Такая ассимметрия увеличивается при изменении первичной последовательности от центра канала к его входу (то есть от N- к C-концу молекулы грамицидина.
Вторым способом получения потенциалзависимого поведения грамицидинового канала является введение в его последовательность сенсора напряжения, только в данном случае эти сенсоры имеют намного меньшие размеры (одна аминокислота) чем в “больших” ионных каналах, а принцип их действия остается неизменным.
Вышеописанные исследования говорят с одной стороны о важности практически всех аминокислот, входящих в последовательность грамицидина (а не только остатков триптофана), и, с другой стороны открывают новые возможности для моделирования структуры и функции канала [41].

2.11.Общее применение в качестве модельной системы

Данные последних исследований методами дифракции ренгеновских лучей, ЯМР-,
КД- и ИК – спектроскопии, а так же компьютерное моделирование и исследование химически модифицированных аналогов позволяют детально понять природу структуры грамицидинового канала и его конформационных переходов.
Результатом использования такого широкого набора методов является возможность по-новому взглянуть на конформационные взамиоотношения в молекуле грамицидина и сравнить их с существующими моделями.

Оглядываясь назад, мы видим что все предложенные изначально конформационные модели являются корректными, отображают общие принципы упаковки полипептидного остова и не противоречат экспериментальным данным, что очень важно для применения в исследовании других молекул.

В качестве модели грамицидин был использован для изучения липид – белковых взаимодействий [77], ионной проводимости [78], влияния трехмерной структуры на функцию [17]. Но применять эту модель нужно очень осторожно, из-за маленьих размеров, молекула грамицидина очень подвижна и принмает множество конформаций в зависимости от внешних условий, в то время как “большие” ионные каналы, состоящие из длинных полипептидных цепей, а иногда и нескольких субъедениц, имеют довольно стабильную пространственную структуру в условиях, близких к физиологическим (или же имеют небольшие вариации прис охранении общего способа укладки полипептидной цепи). Таким образом, определяя еденичную трехмерную структуру “большого” канала мы с большой вероятностью можем сказать что эта конформация и представляет из себя активный канал.
Сначала было предположенно, что структурно функциональные отношения в грамицидине более просты для понимания, в связи с тем, что ионсвязывающие сайты образованны только карбонильными группами полипептидного остова, а не боковыми радикалами аминокислот, и было предположенно, что на связывание ионя влияет только конформация полипептидного остова. При более детальном исследованиии аналогов с измененной первичной последовательностью выяснилось, что даже находясь на внешней стороне канала и далеко от сайтов связывания боковые радикалы аминокислот оказывают сильное влияние на свойства проводимости и конформационной стабильности, что так же должно быть учтено в модельных исследованиях.

2.12.Практическое применение грамицидина

Помимо большого фундаментального значения молекулы грамицидина для понимания структурно-функциональных взаимоотношений в мембраноактивных белках, он так же нашел и практическое приминение, опять же основанно на каналобразующем свойстве этой молекулы. Приведем лишь два самых ярких примера такого использования. Превое: был разработан метод пэтч калмп регистрации с использованием грамицидин перфорированных мембран, что дает возможность изучать анион проводящие каналы (такие как GABA- и глициновые рецепторы) в условиях, не затрагивющих их функции [81]. Второе использование, основанное на современных достижениях органического синтеза относится к разряду молекулярных нанотехноогий и является создание на основе грамицидинового канала мембрансопряженного биосенсора [82]. Принцип действя такой наномашины основан на преобладающей структуре грамицидина в мембране ((6,3-спиральный димер). Основным элементом такого биосенсора является прикрепленная к электроду мембрана, в которую встроен грамицидин.
Один из мономеров грамицидина закрепленн в нижнем слое мембраны и, таким образом является неподвижным. Вторая часть грамицидинового канала модифицирована “связывающим агентом” (антиген, антитело, лиганд) и свободно диффундирует в верхнем слое мембраны. При добавлении анализируемого раствора, и наличии в нем веществ имеющих сродство к
“связывающему агенту”, происходит спецефическое взаимодействие, приводящее к инактивации грамицидинового канала. Таим образом, детекция наличия каких- либо веществ в анализируемогом растворе происходит путем измерения проводимости грамицидинового канала. Помимо большого практического применения данная система может иметь большое фундаментальное значение при понимании принципов передачи сигнала через мембрану (как это происходит например в рецепторах сопряженных с G-белками).

[pic]
Рисунок 7. Схема мембрансвязанного биосенсора на основе грамицидинового канала. А – грамицидиновый канал открыт , спецефическое связывание отсутствует. В – произошло спецефическое связывание произошло, грамицидиновый канал закрылся. Мономеры грамицидинового канала показаны красным цветом; зеленым цветом показана спейсерная группа; коричневым цветом показан “связывающий агент”; синим цветом показан аналит, спецефически взаимодействующий со “связывающим агентом”.

Список литературы

1. Hotchkiss R.D., Dubos R.J. 1940, Journal of Biological Chemistry: v.132 p.791
2. Sarges R., Witkop B.,1964 Journal of American Chemical Society, vol.86, p.1862
3. Sarges R., Witkop B., 1965 Journal of American Chemical Society, vol 87, p.2011
4. Sarges R., Witkop B., 1965 Journal of American Chemical Society, vol 87, p.2027
5. Sarges R., Witkop B, 1965 Biochemistry, vol. 4, p.2491
6. Weinshtein S., Wallace B., et.al., 1980 Journal of Molecular Biology, vol 143, p1
7. Gross E., Witkop B., 1965 Biochemistry, vol. 4, p:2495
8. Koeppe R.E. II, Paczkovski J.A., Whaley W.L., 1985 Biochemistry, vol.

24, p.:2822
9. Gause G.F., Brazhnikova M.G., 1944 Lancet, vol. 247, p.:715
10. Veatch W.R., Fossel E.T., Boult E.R., 1974 Biochemistry, vol. 13, p.5249
11. Urry D.W., 1971 Proc Natl Acad Sci U S A, vol.68, p672
12. Ramachandran G.N., Chandrasekaran R, 1972 Ind. J. Biochem. Biophys., vol.9, p.1
13. Urry D.W., 1971 Proc. Natl. Acad. Sci. U S A, vol 68, p.1907
14. Ramakrishnan G.N., Ramachandran G.N., 1965 Biophys. J., v.5, p909
15. Fossel E.T , Veatch W.R, Ovchinnikov Y.A., Buolt E.R., 1974

Biochemistry, vol.13, p5264
16. Veatch W.R, Boult E.R., 1974 Biochemistry, vol.13, p5257
17. Wallace B.A., 1990 Annu. Rev.Biophys. Biophys Chem., vol.19, p.127
18. Bystrov V.F., Arseniev A.S., 1988. Tetrahedron, vol.44, p.925
19. Langs D.A., 1988 Science, vol.241, p.188
20. Сычев С.В., Невская Н.А., Иорданов С., Мирошников А.И., Иванов В.Т.

1980, Биоорганическая химия, том 9, стр.121
21. Hawkes G.E., Lian L.-Y., Randall E.W. 1987, Eur. J. Biochem., vol.166, p. 437
22. Isbell B.E., Rice-Evans C, et.al. 1972 FEBS Lett., vol 25, p. 192
23. Killian J.A., Prasad K.U., et.al. 1988 Biochemistry, vol.27, p.4848
24. Wallace B.A., Veatch W.R., Boult E.R. 1981 Biochemistry, vol. 20., p.

5754
25. Weinstein S., Durkin J.T., et.al. 1985 Biochemistry, vol.24, p. 4374
26. Weinstein S., Wallace B.A., Boult E.R, et.al 1979 Proc. Natl. Acad.

Sci. U S A, vol. 76, p.4230
27. Weinstein S., Wallace B.A, et.al 1980 J. Mol.Biol., vol.143, p.1
28. Wallace B.A. 1986 Biophys. J., vol. 49, p.295
29. Kleinfeld A.M., 1987 Curr. Top. Membr. Tansp., vol.29, p.1
30. Scarlata S.F., 1988 Biophys.J., vol.54, p.1149
31. Veatch W.R, Mathies R., et.al. 1975 J.Mol.Biol., vol.99, p.75
32. Veatch W.R, Styer L. 1977 J.Mol.Biol, vol.113, p.89
33. Masotti L., Spisni A., et.al. 1980 Cell Biopys., vol.2, p.241
34. Bamberg E., Lauger P., 1977 J.Membr. Biol., vol.35, p.351
35. Killian J.A., de Kruijff B., et.al. 1983 Biochim. Biophys. Acta., vol.78, p. 141
36. Cornell B., Separovic F., et.al. 1988 Biophys.J., vol. 53, p. 67
37. Arseniev A. S Ovchinnikov Yu, A.., Barsukov, I. L.Bystrov, V.

F,.Lomize, A. L. 1985 FEBS Lett., vol.186, p.168
38. Durkin J.T., Andersen O.S., et.al. 1986 Biophys.J., vol.49, p.118
39. Szabo G., Urry D. W. 1979 Proc. Natl. Acad. Sci. U S A, vol.68., p.672
40. Bradley R.J., Urry D.W., et.al. 1978 Science, vol.200, p.435
41. Koeppe R.E. & Andersen O.S. 1996 Annu. Rev. Biophys.Biomol. Struct., vol. 25, p.231-258
42. Sychev, S. V.Barsukov, L. I.Ivanov, V. T. 1993 Eur Biophys J, vol.22, p. 279-88.The double pi pi 5.6 helix of gramicidin A predominates in unsaturated lipid membranes
43. Hladky S.B., Haydon D.A., 1972 Biochim. Biophys. Acta., vol.274, p.294
44. Eisenman G., Sandblom J.P., Neher E. 1978 Biophys.J., vol.22, p.307
45. Mazet J.-L., Andersen O.S.,Koeppe R.E. 1984 Biophys.J., vol.45, p. 263
46. Veatch W. R., Durkin J.T. 1980 J.Mol.Biol., vol.14, p.411
47. Hinton J.F., Whaley W.L., et.al. 1986 Biophys.J., vol.50, p. 539
48. Dani. J.A., Levitt D.G. 1981 Biophys.J., vol.35, p.501
49. Hinton J.F., Fernandez J.Q., et.al. 1989 Biophys.J., vol.55, p.327
50. Wallace B.A. 1983 Biopolymers, vol.22, p. 397
51. Hinton J.F., Koeppe R.E. II, et.al. 1986 Biophys.J., vol.49, p.571
52. Urry D.W., Trapane T.L., et.al. 1983 Science , vol.221, p.1064
53. Cornelis A., Laszlo P., 1989 Biochemistry, vol.18, p.2004
54. Arseniev A.S., Barsukov I.L., Bystrov V.F. 1985 FEBS Lett., vol.180, p.33
55. Koeppe R.E.II, Berg J.M., et.al. 1979 Nature, vol.279, p.723
56. Wallace B.A., Ravikumar K. 1988 Science, vol.241, p.182
57. Sung S. –S., Jordan P. C. 198 Biophys.J., vol.54, p. 519
58. Lee W.K., Jordan P. C.1984 Biophys.J., vol.46, p.805
59. Urry D.W., Alonso-Romanovsky S., et.al. 1984 J.Membr.Biol., vol. 71, p.205
60. Trudelle Y., Daumas P., et.al. 1987 FEBS Lett., vol.216, p.11
61. Barret Russel E.W., Weiss L.B., et.al. 1986 Biophys.J., vol.49, p.673
62. Ovchinnikov Y.A., Ivanov V.T. 1983 In Conformation in Biology, ed. R.

Srinivasan, R.H. Sarma, p.155, New York: Academic
63. Busath D.D., Andersen O.S., Koeppe R.E.II., 1987 Biophys.J., vol.51, p.79
64. Busath D.D., Szabo G. 1981 Nature vol.294, p.371
65. Busath D.D., Szabo G. 1988 Biophys.J., vol.53, p.689
66. Andersen O.S., Koeppe R.E., et.al. 1987 In Transport through membranes, ed. K.Ygi, B.Pullman, p.295. Tokyo: Academic
67. Wallace B.A. 1985 Biophys.J., vol.45, p.114
68. LoGrasso P.V., Moll F.III, Cross T.A., 1988 Biophys.J., vol.54, p.259
69. Killian J.A., de Kruijff B., 1985 Biochemistry vol.24, p.7881
70. Meulendijks G. Sonderkamp T., et.al., 1989 Biochim. Biopphys. Acta vol.979, p.321
71. Waalace B.A., Veatch W.R., Boult E.R. 1981 Biochemistry vol.20, p.5754
72. Durkin J.T., Koeppe RE II, Andersen O.S. 1990 J.Mol.Biol. vol.211, p.221
73. Fonseca V., Daumas P., et.al. 1992 Biochemistry vol.31, p.5340
74. Mukherjee P.K. & Paulus H. 1974 Proc. Natl. Acad. Sci USA, vol.74, no.2

75. .Sarcar. N et al., 1974 Proc. Natl. Acad. Sci USA, vol.74, no.4, pp.1478-1482,
76. Langs D.A. 1989 Biopolymers vol.28(1), p.259
77. Killian J.A., Taylor MJ, Koeppe DE II. 1992 Biochemistry vol.31, p.11283
78. Finkelstein A, Andersen OS. 1981. J.Membr. Biol. vol.59, p.155
79. Hodges RS, Merrifield RB, 1975 Anal. Biochem. vol.65, p.241
80. Paul BW, Ten Kortenaar, et.al. 1986 Int. J.Pep. Pro. Res., vol.27, p.398

1. Овчинников Ю.А., Иванов В.Т, Шкроб А.М.; ''Мембрано-активные комплексоны", Москва , "Наука", 1974, стр.40-47, 174.
2. N.Sarcar et al., Proc. Natl. Acad. Sci USA, vol.74, no.4, pp.1478-1482,
1974
3. P.K. Mukherjee & H. Paulus Proc. Natl. Acad. Sci USA, vol.74, no.2 ,
1974
4. Hladky & Haydon , Nature, vol.255, pp. 451-453, 1970
5. W.R Veatch & E.R. Boult, Biochemistry vol.13 no. 26, 1974, pp.5257-5261
6. D.W. Urry, Proc. Natl. Acad. Sci USA, vol.68 pp.672-676
7. Ramachandran & Chandrasekaran, Ind. J. Biochem. Biophys., vol.9, pp1-11,
1972
8. E. Fossel, W. R. Veatch, Y. A. Ovchinnikov , E. Boult, Biochemistry vol.13 no. 26,

1974, pp 5264-5275
9. Шепель Е.Н. и др., Биоорг. химия, 2, 581-593 (1976)
10. Cычев С.В., Фонина Л. А., Иванов В.Т., Биоорг. химия, 8, 1080-1088
(1984)
11. Ivanov V.T., "From structure towards the molecular mechanism of action", in

Peptides 1982
12. D.W. Urry, in "Spectroscopy of Biological Molecules", 487-510
13. Wallace B.A. & Boult E.R. (1979), Proc. Natl. Acad. Sci USA, vol.75,
1775-1779
14. Wallace B.A., W.R. Veatch & E.R.Boult (1981), Biochemistry,20: 5754-
5760.
15. Сычев С.В., Невская , Иорданов С.Т. и др. (1980), Биоорг. химия, 9: 121-
151
16. Arseniev A.S., Bystrov V.F., V.T.Ivanov & Yu.A. Ovchinnikov (1984),
FEBS

(Fed. Eur. Biochem. Soc.) Lett. 165:51-56.
17. Arseniev A.S., Barsukov I.L., Bystrov V.F., A.L.Lomize & Yu.A.
Ovchinnikov

(1985), FEBS (Fed. Eur. Biochem. Soc.) Lett.186: 168-174.
18. Urry D.W., J.T. Walker, & T.L. Trapane (1980), J. Membr. Biol. 69: 225-
231.
19. Arseniev A.S., Barsukov I.L. & Bystrov V.F (1985) FEBS (Fed. Eur.
Biochem

. Soc.) Lett. 180: 33-39.
20. S.V.Sychev, S.V. Sukhanov, L.I. Barsukov & V.T. Ivanov (1996), J. Pep.
Sci.

2:141-156.
21. N. Mobashery, C. Nielsen, O.S. Andersen (1997), FEBS (Fed. Eur.
Biochem.

Soc.) Lett. 412: 15-20.
22. Cornell B.A.,& M.A. Keniry (1983), Biochim. Biophys. Acta. 732: 705-
710.
23. P. Daumas, D. Benamar & other., (1991) Int. J. Peptide Protein Res. 38:
218-228.
24. Wallace B.A, (1986), Biophys. J. 49: 295-306.
25. V. Krchnak, J. Vagner, P. Safar & M. Lebl (1988), Collection
Czechoslovak

Chem. Commun. 53: 142-148.
26. K. U. Prasad, S. Alonso-Romanovski & other, (1986) Biochemstry , 25:
456-463
27. K. Bauer, R. Roskoski, H. Kleinkauf & F. Lipmann (1972) Biochemistry,
11: 3266-3270.
28. C.G Fields, G.B. Fields & other, (1989) Int. J. Peptide Protein Res.,
33: 298-303.

Страницы: 1, 2