| |||||
МЕНЮ
| Литература - Другое (книга по генетике)ликом определяются свойствами ДНК. Присущие этим молекулам потенциальные возможности практически неограниченного струк- турного разнообразия определяют все многообразие мира живых существ, как на уровне межвидовых, так и индивидуальных раз- личий в пределах одного вида (Баев и др.,1990; Ратнер,1985). Процесс эволюции и дифференцировки отдельных видов, как правило, сопровождался накоплением изменений в структуре ге- нома. Это касается, прежде всего, таких параметров, как ло- кализация и характер упаковки ДНК в клетках; количество ДНК, приходящееся на гаплоидный геном; типы, соотношение и функ- ции кодирующих и некодирующих нуклеотидных последователь- ностей; регуляция экспрессии генов; межпопуляционная вариа- бильность и филогенетический консерватизм первичной структу- ры генома. В пределах одного вида основные параметры генома достаточно постоянны, а внутривидовое разнообразие обеспечи- вается за счет мутационной изменчивости, то есть выпадения, вставки или замены нуклеотидов на сравнительно небольших участках ДНК. Чаще всего такие изменения касаются не- экспрессируемых элементов генома (интронов, псевдогенов, межгенных спэйсерных участков ДНК и т.д.). Геномы эукариот, по-существу, можно рассматривать как мультигеномные симбиотческие конструкции, состоящие из обли- гатных и факультативных элементов (Golubovsky, 1995). Основу облигатных элементов составляют структурные локусы, коли- чество и расположение которых в геноме достаточно постоянно. Присутствие в хромосомах некоторых видов повторяющихся ДНК, амплифицированных участков, ретровирусных последователь- ностей, псевдогенов, также как наличие в клетке эписом, рет- ротранскриптов, ампликонов, дополнительных B-хромосом и раз- личных цитосимбионтов (вирусов, бактерий, простейших) явля- ется не строго обязательным, их количество и положение может значительно варьировать, то есть эти элементы являются фа- культативными. В то же время участие факультативных элемен- тов в наследственной передаче признаков, в формировании му- тационной изменчивости и в эволюционных преобразованиях ви- дов несомненно доказано. Кроме того, существует непрерывный переход от одних состояний к другим за счет инсерции экстрахромосомных ДНК в хромосомы и выстраивания транспозо- ноподобных мобильных элементов из хромосом. Следовательно, несмотря на значительные отличия факультативных последова- тельностей от облигатных по характеру основных информацион- ных процессов (репликации, транскрипции, трансляции и сегре- гации), они также должны рассматриваться, как важнейшие эле- менты генома. Остановимся теперь более детально на основных принципах организации генома человека. В каждой диплоидной клетке с 46 хромосомами содержится около 6 пикограмм ДНК, а общая длина гаплоидного набора из 23 хромосом составляет 3.5 * 10!9 пар нуклеотидов (Kao, 1985). Этого количества ДНК достаточно для кодирования нескольких миллионов генов. Однако, по многим независимым оценкам истиное число структурных генов нахо- дится в пределах от 50 000 до 100 000. В разделе 2.4 изложе- ны современные подходы, используемые для подсчета общего ко- личества генов, из которых следует, что наиболее вероятная оценка их числа составляет около 80 000. Сопоставляя это значение со средними размерами гена и соотношением между ве- личиной их экзонных и интронных областей, можно заклю- чить,что кодирующие последовательности ДНК занимают не более 10-15% всего генома (McKusick, Ruddle, 1977). Таким образом, основная часть молекул ДНК не несет информации об амино- кислотной последовательности белков, составляющих основу лю- бого живого организма, и не кодирует структуру рибосомаль- ных, транспортных, ядерных и других типов РНК. Функции этой "избыточной" (junk) ДНК не ясны, хотя ее структура изучена достаточно подробно. Предполагается, что эта ДНК может участвовать в регуляции экспрессии генов и в процессинге РНК, выполнять структурные функции, повышать точность гомо- логичного спаривания и рекомбинации, способствовать успешной репликации ДНК и, возможно, является носителем принципиально иного генетического кода с неизвестной функцией. Наиболее общая характеристика генома может быть получена с помощью анализа кинетики реассоциации молекул ДНК. Динами- ка плавления геномной ДНК обнаруживает присутствие по край- ней мере трех различающихся по химической сложности фракций (Льюин, 1987; Газарян, Тарантул, 1983). Быстро ренатурирую- щая фракция ДНК состоит из относительно коротких высокопов- торяющихся последовательностей; в промежуточную фракцию вхо- дит множество умеренно повторяющихся ДНК - более протяжен- ных, но представленных меньшим числом копий; медленно рена- турирующая фракция объединяет в себе уникальные последова- тельности ДНК, встречающиеся в геноме не более 1-2 раз. С помощью молекулярного анализа проведена идентификация основных классов повторяющихся последовательностей ДНК, составляющих более 35% всего генома человека и включающих сателлитную ДНК, инвертированные повторы, умеренные и низко- копийные повторы, а также мини- и микросателлитные последо- вательности ДНК. Классификация этих типов повторов достаточ- но условна и основана, главным образом, на двух характе- ристиках: длине повторяющихся коровых единиц, которая может варьировать от 1-2 до более, чем 2000 п.о., и числе их ко- пий, также меняющихся в очень широких пределах - от десятка до миллиона на гаплоидный геном. Не менее важными характе- ристиками различных классов повторяющихся ДНК являются нук- леотидная последовательность "коровых" единиц повтора, спе- цифичность их организации, хромосомная локализация, внутри- и межвидовая стабильность, а также возможные функции этих типов ДНК. Раздел 2.2. Повторяющиеся последовательности ДНК. Сателлитная ДНК это класс высокоповторяющихся последо- вательностей, составляющих около 10% всего генома человека (Kao, 1985). При центрифугировании геномной ДНК в градиенте плотности CsCl эти последовательности образуют четыре от- дельных сателлитных пика с различными средними значениями плавучей плотности. Методом гибридизации in situ показано присутствие сателлитной ДНК преимущественно в центромерных, теломерных и гетерохроматиновых районах большинства хро- мосом, при этом характер гибридизации сходен для всех четы- рех групп и не зависит от принадлежности ДНК-зондов к се- мействам повторов, образующих различные сателлитные пики. В каждой из этих групп, однако, присутствует небольшое коли- чество последовательностей, имеющих специфическую хромосом- ную локализацию. Так например, около 40% длинного плеча Y хромосомы составляет семейство последовательностей, тандемно повторяющихся более 3000 раз и не найденных в других хро- мосомах. Выделяют три основных типа сателлитной ДНК: (1) короткие - от 2 до 20 п.о., стабильные тандемные повторы с кратностью в несколько десятков тысяч раз, которые иногда перемежаются с неповторяющимися последовательностями; (2) кластеры более протяженных повторов, слегка различающихся по нуклеотидной последовательности; (3) сложные, достигающие нескольких со- тен пар нуклеотидов, повторяющиеся последовательности раз- личной степени гомологии (Газарян,Тарантул,1983). К послед- нему типу относятся альфа-сателлитные или альфоидные ДНК, среди которых найдено много хромосом-специфических последо- вательностей. Размеры повтрояющихся "коровых" единиц альфо- идной ДНК составляют около 170-200 п.о. В геноме человека и других приматов эти мономеры организованы в кластеры по 20 и более "коровых" единиц. После расщепления рестриктазой BamHI в альфоидной ДНК выявляется серия фрагментов, длиной около 2 000 п.о., в составе которых обнаруживаются альфоидные после- довательности, специфичные для гетерохроматиновых районов разных хромосом человека (1, 3, 4, 5, 9, 6, 7, 11, 17, 19, Х). В некоторых случаях эти повторы гомологичны двум разным хромосомам (9 и 15, 13 и 21, 18 и Х) ( Willard,Waye, 1987). Хромосом-специфические последовательности сателлитной альфо- идной ДНК нашли широкое применение в молекулярной цитогене- тике в качестве ДНК-зондов, удобных для маркирования индиви- дуальных хромосом в метафазных и интерфазных клетках челове- ка (Юров, 1987). Предполагается, что сателлитные ДНК играют важную роль в поддержании структур хромосом и, возможно, в их спаривании в процессе мейоза (Charlesworth et al., 1994). Особое место среди сателлитных ДНК занимают микро- и минисателлитные последовательности, представляющие собой многочисленную группу рассеянных по всему геному относитель- но коротких тандемных повторов. Микросателлиты - это класс динуклеотидных повторов. Размер повторяющихся единиц в ми- нисателитных последовательностях может меняться от 3 - 4 до 10 - 15 нуклеотидов. Отличительной особенностью микро- и ми- нисателлитов является наличие среди них большого количества участков, вариабильных по числу копий в кластере. Инвертированные или обращенные повторы составляют до 5% генома. Они состоят из двух тождественных копий длиной около 300 п.о., ориентированных в противоположных направлениях на одной нити ДНК и лежащих на расстоянии от нуля до десятка тысяч пар нуклеотидов друг от друга (в среднем - 1,6 кб). Около 1/3 обращенных повторов не разделены промежуточными последовательностями и носят название палиндромов. Среднее расстояние между двумя различными парами инвертированных повторов около 12 кб, и их распределение по геному носит случайный характер. Комплементарные пары легко ассоциируют при отжиге, образуя шпилечные структуры с дуплексной ножкой и однонитевой петлей, длина которой соответствует расстоянию между парой обращенных повторов. Вследствие этого оказыва- ются приблеженными достаточно удаленные друг от друга участ- ки ДНК, что важно для работы ряда ферментов, обеспечивающих процессы репликации и транскрипции. Важно отметить и то, что однонитевой участок ДНК, образующий петлю, становится доступным для действя нуклеазы S1, специфически разрушающей однонитевую ДНК. Группа умеренно повторяющихся последовательностей очень гетерогенна по длине и числу копий и составляет около 20% генома человека. Как правило, они распределены дисперсно по всем хромосомам, причем относительно короткие последователь- ности ДНК до 500 п.о., так называемые короткие диспергиро- ванные повторы - Sine, повторяются более 100 000 раз, в среднем, через каждые 2.2 кб. Число копий более длинных диспергированных последовательностей - Line, не превышает 10 000. Умеренные повторы найдены во всех структурных компонен- тах генома за исключением кодирующих областей генов. Два главных семейства умеренных повторов, Alu и Kpn1, занимают, по крайней мере, 10% генома и практически столько же занято несколькими сотнями других семейств повторов этого класса. Основной единицей Alu семейства является короткая последовательность из 300 п.о., повторенная в геноме челове- ка несколько сот тысяч раз, в среднем, через каждые 5 кб или через каждые 2 - 3 диспергированных повтора, принадлежащих другим семействам (Kao, 1985; Льюин, 1987). При этом, кластеры Alu-повторов, как правило, лежат внутри R-дисков метафазных хромосом - Гимза отрицательных (G- дисков). Расп- ределение Alu-повторов по геному весьма неравномерно как между хромосомами, так и по их длине. Так, в хромосомах 14, 16, 21 Alu-последовательности концентрируются в области центромеры, а в хромосомах 4, 19, 20, Х и У выраженные кластеры Alu повторов не найдены. Члены Alu семейства не полностью идентичны друг другу. Однако, все они содержат сайт рестрикции для фермента AluI и имеют димерную структу- ру, то есть состоят из двух прямых повторов длиной около 130 п.о. с богатой аденином вставкой из 31 нуклеотида во втором мономере. Каждая Alu последовательность фланкирована прямыми повторами длиной от 7 до 20 п.о., различными для разных чле- нов семейства и имеющими большую степень гомологии с транспозоноподобными элементами про- и эукариот. Некоторые члены Alu семейства могут транскрибироваться с помощью фер- мента РНК-полимеразы 111. Предпологается, что при определен- ных условиях образующиеся при этом молекулы РНК могут обрат- но транскрибироваться, что в свою очередь, может привести к появлению в клетках Alu-содержащих кДНК, обладающих свойствами ретропазонов, то есть способных инсертироваться в геномную ДНК. В литературе описаны случаи инсерционного му- тагенеза Alu повторов, приводящие к гемофилии В и нейрофиб- роматозу типа 1. Однако, частота таких событий, по-видимому, невелика. Предполагается, что короткие умеренные повторы, подобные Alu семейству, участвуют в регуляции транскрипции, в процессинге РНК и в инициации репликации ДНК. Кроме того, обнаружена высокая степень гомологии Alu последовательностей с одним из видов низкомолекулярной РНК (7 S РНК), участвую- щей в секреции белков. К числу Line повторов относится Kpn1 семейство, которое состоит из более длинных и значительно более гетерогенных последовательностей, рассеянных по всему геному. В ряде слу- чаев члены Kpn1 семейства группирются в кластеры, образуя более длинные структуры, повторяющиеся несколько тысяч раз. Для некоторых членов этого семейства также доказана возмож- ность инсерции кДНК-овых копий Kpn1- РНК-транскриптов в ге- номную ДНК и возникновение мутаций. Такое явление было обна- ружено в одном случае гемофилии А. Некоторые Kpn1- последо- вательности не только транскрибируются, но и способны транслироваться (Charlesworth et al.,1994). Раздел 2.3 Мультигенные семейства, псевдогены, онкоге- ны. Многие гены человека повторены в геноме от нескольких единиц до нескольких сотен раз и образуют мультигенные се- мейства (Газарян, Тарантул, 1983; Босток, Самнер, 1981; Kao, 1985; Льюин, 1987). Эти гены обычно сгруппированы в кластеры в определенных районах одной, либо нескольких хромосом. Во многих мультигенных семействах наряду с функционально актив- ными генами содержатся псевдогены - мутационно измененные последовательности, не способные транскрибироваться или про- дуцирующие функционально неактивный генный продукт. Примера- ми мультигенных семейств могут служить гены рибосомальных, транспортных и ядерных РНК, гены альфа- и бета-глобинов, ту- булинов, миоглобина, актина, интерферона и многих других. В ряде случаев, возможна избирательная амплификация некоторых семейств генов в процессе их экспрессии, как, например, ге- нов рибосомальных РНК. При этом число способных транскриби- роваться копий генов увеличивается за счет их избирательной амплификации в сотни и даже тысячи раз, что сопровождается лавинообразным нарастанием доли соответствующего генопродук- та в клетках. Особое место среди мультигенных семейств зани- мают супергены - очень большие кластеры из сотен функцио- нально и структурно родственных генов, расположенных в сег- ментах отдельных хромосом. Классическим примером супергена может служить HLA комплекс, контролируюший главные антигены гистосовместимости. Он занимает район более 6000 кб на ко- ротком плече хромосомы 6р21 и состоит из серии тесно сцеп- ленных генов, ответственных за синтез множества белков, включающих клеточные поверхностные антигены, молекулы иммун- ного ответа и некоторые компоненты комплемента. К суперген- ным семействам относятся три комлекса расположенных на раз- ных хромосомах мультигенов, контролирующих синтез тяжелых и легких цепей иммуноглобулинов. Интересно, что в процессе диффиренцировки B лимфоцитов, продуцирующих иммуноглобулины, происходит структурная перестройка этих семейств. При этом отдельные последовательности ДНК элиминируются, тогда как другие сливаются, так что структура генов иммуноглобулинов в зрелых B лимфоцитах значительно отличается от исходной, то есть от той, которая наблюдается в зародышевых клетках. Одной из важных структурных особенностей генома челове- ка является наличие так называемых псевдогенов, уникальных последовательностей, очень сходных по своей структуре с оп- ределенными нормальными генами, но в силу присутствия в ко- дирующих последовательностях целого ряда мутаций не способ- ных транскрибироваться или правильно транслироваться с обра- зованием структурно и функционально активного продукта. Псевдогены обнаружены для многих генов. Их количество варь- ирует от одной до нескольких десятков копий на геном и в этом случае они, как правило расположены тандемно. Иногда псевдогены тесно сцеплены с нормальными генами, во многих случаях псевдогены и гены локализованы в разных хромосомах. Для некоторых моногенных заболеваний идентифицированы му- тантные аллели, сходные с мутациями в соответствующих псев- догенах. В этих случаях обсуждаеся возможная роль псевдоге- нов в спнтанном мутационном процессе. В геноме человека присутствуют также нуклеотидные последовательности, гомологичные генам некоторых вирусов. Впервые эти последовательности были идентифицированы в гено- ме вирусов, индуцирующих развитие опухолей у животных и че- ловека, и потому они были названы онкогенами. Гомологичные последовательностям в геноме человека носят название прото- онкогенов. В настоящее время уже идентифицировано более 100 протоонкогенов. Белковые продукты протоонкогенов, по-видимо- му, играют важную роль в нормальной пролиферации клеток осо- бенно на ранних стадиях эмбрионального развития, контролируя клеточный цикл и выбор геномной программы развития клетки. При возникновении специфических мутаций в протоонкогенах, а Страницы: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35 |
ИНТЕРЕСНОЕ | |||
|